فعالیت آنتاگونیستی تریکودرما روی S. sclerotiorum در ازمایشگاه
آنتاگونیسم سویه های تریکودرما موجود در قارچ کش ارگانیک به فیتوپاتوژن S. sclerotiorum با روش کشت دوگانه اصلاح شده از تأیید شد. به طور خلاصه دیسکهای قارچی ۵ میلی متری از لبه کلنی های ۳ روزه جمع آوری و به طور همزمان در دو طرف مقابل صفحات PDA قرار گرفتند. هفت روز پس از کشت رشد قارچها بررسی شد.
جایگزین های بی خطر سموم کشاورزی
یک قارچ کش ارگانیک زمانی آنتاگونیست در نظر گرفته می شود که گزینه های جایگزین بی خطر برای محیط زیست را جایگزین سموم دفع آفات شیمیایی بطور معمول در سیستم های تولید مواد غذایی می کنند. محصولات بیولوژیکی حاوی میکروارگانیسم های آنتاگونیست را به بازار آمده اند. در میان آنها ، Trichoderma spp. سزاوار توجه ویژه است بررسی ها حاکی از در دسترس بودن بیش از ۲۵۰ محصول مبتنی بر قارچ کش ارگانیک تریکودرما در بازار بین المللی و پذیرش روزافزون آن در کشاورزی برزیل است. تنوع محصولات به طور عمده شامل تفاوت در انواع قارچ ها و فرمولاسيون ها جنبه هاي برتري در كارايي محصولات زيستي و ماندگاري است.
بررسی کیفیت قارچ کش بیولوژیک
کیفیت یک محصول بیولوژیکی از جمله قارچ کش ارگانیک می تواند از فرایند تولید آن تا کاربرد آن در این زمینه متفاوت باشد. بنابراین برای اطمینان از کارایی باید بطور دوره ای بررسی شود. اگرچه هیچ متدولوژی استانداردی وجود ندارد اما ارزیابی کیفیت یک محصول زیستی اساساً با سه معیار انجام می شود: غلظت صفحات، شمارش اسپور و قابلیت دوام. تأیید آلودگی باکتریایی به همان اندازه مهم است که حضور آن باعث کاهش ماندگاری قارچ کش ارگانیک می شود. غلظت های بالاتر آنتاگونیست در محصولات زیستی مورد آزمایش با تعیین مستقیم تعداد اسپورهای زنده در یک اسلاید هموسیتومتر ثبت شد. در مقایسه با کمیت در یک صفحه این ممکن است رخ دهد. زیرا تکثیرهای مجاور پس از پخش شدن روی سطح صفحه بصری فقط یک کلنی را تشکیل می دهند و نتیجه را دست کم می گیرند. در نتیجه شمارش اسپورهای شخصی در زیر میکروسکوپ سبک اتفاق نمی افتد.
قارچکش تریکودرماروت نیکورایی
از بین تمام اسپورهای شمارش شده قارچ کش ارگانیک تریکودرماروت nikooraee تنها محصول بیولوژیکی با درصد جوانه زنی کمتر از ۹۰ بود. همزمان با آلودگی بیشتر آن توسط سلولهای باکتریایی. با دستیابی به غلظت روی صفحه از طریق روش شمارش غیرمستقیم (رقیق سازی سریال تعلیق قارچ ها) ، محصول بیولوژیکی SF04 غلظت تریکودرما را فراتر از گفته شده در برچسب محصول ، معادل ۱۰۱۰ F 5.0 CFU g-1 نشان داد (جدول ۴). قارچ کش ارگانیک علیه اسکلروتینیا و تمام محصولات زیستی ارزیابی شده حداقل غلظت آنتاگونیست توصیه شده برای تجاری ، ۱۰۶ F 2 CFU mL-1 یا CFU g-1 در محیط کشت را ملاقات کردند و هیچ آلودگی بیماری زای متعلق به جنس سالمونلا ، شیگلا یا ویبریو [۳۰]. با این حال ، آنها برای آلودگی میکروبی بیش از حد مجاز بودند (تعداد ۱۰۴ ۱ ۱ در هر میلی لیتر در گرم).
شرایط لازم برای تولید و استفاده از سم ارگانیک
به دلیل اختلاف بین مقادیر غلظت آنتاگونیست داخل قارچ کش ارگانیک اندازه گیری شده توسط شمارش اسپور (اندازه گیری مستقیم) و تعداد کلنی های آزمایشگاهی (غیرمستقیم) اندازه گیری شده و برچسب محصول مشخص و مشخص شده است. علاوه بر این محدودیت ها و اصلاح روش ها در نتیجه تداخل می کنند. نگهداری از زنده ماندن به ویژه در هنگام ذخیره محصولات بیولوژیکی قارچ کش ارگانیک نیاز به مطالعات در مورد فرمولاسیون مناسب تر برای ثبات میکروارگانیسم ها دارد. در بازار Trichoderma بر روی بستر کشت آن فروخته می شود. به عنوان مثال محصولات زیستی Tricho و IBLF006 که به صورت زمینی و بسته بندی شده است. این فرمولاسیون (WP) به دلیل گرفتگی نازل مانع از پاشش میدانی می شود و احتمال زنده ماندن قارچ داخل قارچ کش ارگانیک اسکروتینیا کمتر است (۹۰-۶۰٪) و افزایش احتمال آلودگی توسط سایر قارچ ها و باکتری ها (تا ۱۲ × بالاتر از محصولات bioproduct SF04) و باعث کاهش کارایی محصولات می شود.
فرمولاسیون های مختلف تولید قارچکش بیولوژیک
در این زمینه فرمولاسیونهای دیگر قارچ کش ارگانیک موجود در بازار مانند اسپورهای خالص، اسپورهای مخلوط شده در روغن، سیستم تعلیق غلیظ (CS) یا حتی گرانولهای مرطوب (WG) تکنولوژی کاربرد را تسهیل می کنند. برای افزایش ماندگاری معمولاً مواد کمکی برای محافظت از تکثیرها اضافه می شوند. اخیراً برخی از محصولات زیستی از جمله تریکودرماروت نیکورایی با ظهور فرمولاسیونهای متابولیت ثانویه ضد میکروبی تکامل یافته اند. این فرمولاسیون قارچ کش ارگانیک باعث ثبات بیشتر عنصر فعال در محیط ذخیره سازی دمای اتاق می شوند و این باعث می شود که تجارت بیو محصول بدون از بین رفتن کیفیت آسان تر شود. علاوه بر این آنها از نظر سهولت کاربرد محافظت در برابر اشعه ماوراء بنفش در شرایط مزرعه، اقدام علیه پاتوژن مورد نظر بدون به خطر انداختن میکروبیوتای خاک و محافظت از ماده مؤثر هنگام مخلوط کردن با سایر مواد شیمیایی مزایایی ارائه می دهند. انتخاب محصولی با کیفیت و همراه با فرمولی که تضمین ثبات و کارآیی در کاربرد و کنترل SSR بسیار مهم است.
کشت دو گانه عامل کنترل بیولوژیک با پاتوژن
اثر آنتاگونیستی سویه های تریکودرمای داخل قارچ کش ارگانیک برای اولین بار از طریق کشت همزمان در شرایط آزمایشگاهی و تعیین مساحت صفحه اشغال شده توسط کلنی های Trichoderma و Sclerotinia تأیید شد. با توجه به مقیاس نمودار که ما توسعه دادیم پس از پیشنهادی که در سال ۱۹۸۲ ارائه داد، محصولات زیستی ۲٫۵ امتیاز کسب کردند. بنابراین آنها از نظر آماری تفاوت چندانی با درصد مساحت صفحه پوشش داده شده (۶۴/۶۴ ۶۲ ۶۲٫۴ درصد) نداشتند و در مقابل S. sclerotiorum آنتاگونیست قلمداد می شدند.
علت پیروز شدن تریکودرما بر فیتوپاتوژن ها
کاهش رشد فیتوپاتوژن را می توان به رقابت برای فضا و مواد مغذی محیط کشت نسبت داد که در آن از تناسب اندام عالی محیطی قارچ کش ارگانیک تریکودرما و رشد سریع شعاعی آن در کشت آزمایشگاهی استفاده شده است. سنجش کشت دوتایی آزمایشگاهی ابزار مهمی در فرآیند انتخاب عوامل کنترل کننده زیستی است. این آزمایشات اطلاعات مفیدی در مورد اثربخشی و تغییرپذیری سویه ها و همچنین در مورد حساسیت پاتوژن ها به عوامل ارزیابی شده ارائه می دهند. این آزمایشات در شرایط محیطی کنترل شده انجام می شود که تأثیرات متغیر دما، رطوبت، نور و میکرو فلورای خاک را روی قارچ کش ارگانیک و پاتوژن به حداقل می رساند. ما تفاوت در قدرت آنتاگونیستی در بین گونه های Trichoderma مورد استفاده در این مطالعه که برای جدا شده S. sclerotiorum جدا شده از سویا مستعد بود مشاهده نمی کند. سنجش های کشت دوگانه همچنین به کمک میکروسکوپ نوری یا الکترونی توسط آنالیز کننده آنتاگونیست و فیتوپاتوژن در سطح فراساختاری استفاده می شود. تصاویر SEM نشان داد که همه گونه های Trichoderma قادر به استعمال S. sclerotiorum با نفوذ یا خفه کردن قیف آن بودند. همچنین به رشد هیف موازی اشاره کرد. هر دو فعل و انفعال مشاهده شده در مطالعه ما، خفه شدن و نفوذ توسط قارچ کش تریکودرما، می تواند به عنوان یک رفتار بیش از حد از سویه های تریکودرما موجود در محصولات زیستی تعبیر شود. در طی هایپراپراسیتیسم گونه های تریکودرما به دلیل محرک های شیمیایی تولید شده توسط خود هیفا میزبان هیف های قارچ های مستعد را تشخیص می دهند. آنتاگونیست ها ساختارهای کمد را تشکیل می دهند و کاملاً دور آن را می پوشند که هیفا در آن نفوذ کرده و آن را تنزل می بخشد. این مکانیسم قبلاً توسط محققان بسیاری از طریق تعامل T. harzianum ، T. viride و T. asperellum با Rhizoctonia solani ، sph Pythium ، Fusarium oxysporum ، F. solani ، S. rolfsii ، S. sclerotiorum ، Botrytis cinerea ، Phytophthora نشان داده شده است.
آزمایش های مزرعه ای
فعالیت آنتاگونیستی محصولات زیستی قارچ کش ارگانیک نیز در برابر ساختارهای بقای پاتوژن تأیید شده است (درصد اسکلروتی غیر جوانه زا و اسکلروتی کلونیزه شده توسط تریکودرما به ۵۵٫۶ و ۷۱٫۲۵ رسید. تحت شرایط خاک آلوده شبیه سازی شده تیمارها به طور موثری تلقیح شده با کاهش دو برابر در مقایسه با خاک تصفیه نشده همبستگی منفی (p <0.01 ، R = 0.725 = R) بین جوانه زنی اسکلروتیا و انگلی نشان داد که گونه Trichoderma وجود دارد. استعمار منجر به کاهش پتانسیل تلقیح برای محصولات بعدی می شود. با این حال نباید انتظار داشت که فقط اسپری مستقیم زمین با قارچ کش ارگانیک اسکروتینیا یا تیمار بذر به تنهایی در کنترل S. sclerotiorum مؤثر باشد. ناحیه تماس آنتاگونیست با خاک محدود کننده تکثیر آن است. علاوه بر این رقابت با میکروبیای خاک و شرایط نامطلوب محیطی ممکن است سازش تریکودرما را به خطر اندازد. با این وجود سمپاشی مستقیم زمین و تصفیه بذر می تواند با سایر روش های کشاورزی مانند کاربرد مالچ کمپوست مایع و قارچ کش های شیمیایی همراه باشد.