Leave a comment

محیط کشت جنین انسانی

محیط کشت ها برای کشت جنین های انسانی در شرایط آزمایشگاهی به دور از فرمولاسیون های کشت سلولی به سمت فرمولاسیون های متوالی مرحله خاص جهت تسهیل در ارائه داروهای مختلف، اجزای تشکیل دهنده جنین در طی فعال سازی قبل و بعد از تکامل تکامل یافته اند. بسیاری از فرمولاسیون ها پی در پی تجاری برای استفاده خاص از مرحله وجود دارد و اخیراً دو فرمولاسیون محیط کشت طراحی شده اند که به عنوان یک بستر کشت واحد برای ارائه کلیه مؤلفه ها در جنین در طی تمام مراحل پس از باروری در توسعه آزمایشگاهی مورد استفاده قرار می گیرند.

عوض کردن محیط کشت در طول پروسه پرورش جنین

انتقال جنین ها به داخل ظروف جدید یا تازه کردن محیط کشت جنین در فواصل زمانی به عنوان روشی برای جلوگیری از قرار گرفتن در معرض جنین ها در ساخت بالقوه آمونیوم از تجزیه اسیدهای آمینه یا ترکیبات جوی فرار پیشنهاد شده است. بستر کشت های منفرد (گاهی اوقات به عنوان بستر کشت های تک کشت) نیز گفته می شوند که برای فراهم کردن تمام اجزای جنین در همه زمان ها طراحی شده اند. یک محیط کشت مدرن تک کشت برای محدود کردن ساخت آمونیوم با جایگزینی گلوتامین با فرم پایدارتر می تواند برای کشت مداوم بدون وقفه جنین های انسانی مورد استفاده قرار بگیرد.

انتقال جنین ۳ روزه

برای انتقال جنین های داخل محیط کشت ۳ روزه جنین ها برای تعداد سلول و مورفولوژی گلزنی شدند (نمره Q1-5 ، ۱ بهترین). جنین ها در محیط متوالی سپس به محیط متوالی دوم منتقل شدند. جنین ها در محیط تک بدون تجدید میکرودروپ ها در ظرف اصلی باقی مانده بودند. انتخاب جنین برای انتقال بر اساس تعداد سلول و نمره كیفیت صرف نظر از درمان محیط کشت انسانی انجام شد. بلافاصله قبل از انتقال جنین های منتخب به تقریباً ۳ میلی لیتر ۳۶ درجه سانتیگراد کوین منتقل شدند. دلیل استفاده از این محیط برای انتقال جنین ثبات pH است که در صورت انتقال جنین بیشتر از زمان پیش بینی شده توسط بافر هپس ارائه می شود. کاتتر با حجم کمی از محیط کشت شسته شد و جنین ها در نوک سوند در حجم تقریباً ۱۵-۱۵ میلی لیتر واقع در بین دو حباب هوا کوچک آسپیر شدند. انتقال جنین با استفاده از راهنمایی سونوگرافی انجام شد. ظروف دارای جنین هایی که منتقل نشده بودند به شیشه شیشه ای برگردانده شدند که در مرحله بعد به شرح گازی شد و برای کشت به روز ۵ و / یا ۶ برای ارزیابی برای انجماد به انکوباتور برگشت داده شد (بلاستوسیست های گسترش یافته با توده سلولی آشکار).

انتقال جنین های ۵ روزه

برای انتقال جنین های محیط کشت انسانی روز ۵ جنین ها به طور خلاصه در صبح روز ۳ مشاهده شدند. اما نمرات کیفی به آنها اختصاص نیافته بود. جنین ها در محیط پی در پی به محیط متوالی دوم منتقل شدند. جنین ها در تیمار متوسط ​​تنها بدون تجدید میکرودروپ ها در ظرف اصلی باقی مانده اند. ظروف به شیشه مطابق با توضیحات گازی برگردانده شدند و برای ادامه رشد در محیط کشت تا روز ۵ به دستگاه کشت برگشت داده شدند. در روز ۵ جنین در هر دو ظرف به مرحله رشد و مورفولوژی ذهنی (نمره بلاستوسیست Q1 به Q3 ، ۱) رسید. بهترین بودن ؛ جنین هایی که دارای رشد اولیه بلاستوسل و بدون شناسایی توده سلولی درونی هستند به عنوان بلاستوسیست های اولیه بدست آمدند). انتخاب جنین در هر محیط کشت برای انتقال بر اساس نمره كیفیت بدون در نظر گرفتن كشت درمان متوسط ​​انجام شد. انتقال جنین همانطور که در بالا توضیح داده شد انجام شد. جنین هایی که برای سرمازدگی فوری انتخاب نشده اند (بلاستوسیست های جوجه کشی کاملاً گسترش یافته با توده سلولی درونی در روز ۵ تبخیر شد) به ظرف شیشه ای بازگردانده شدند. همانطور که شرح داده شد گازی شده و برای ادامه کشتدر محیط کشت تا روز ۶ و ارزیابی برای انجماد به انکوباتور بازگشتند. جنین های بارور شده در هر بیمار هر طور که به طور تصادفی به هر یک از محیط های تزریق کشت اختصاص داده شد تا از تغییرات تجربی بین بیماران کاسته شود. داده های رشدی در هر درمان (سیستم کشتی) مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. اما بین روز انتقال جنین با استفاده از آزمون t زوجی و آزمون رتبه قرار نگرفت. مشخصات بیمار و چرخه نتایج حاملگی و داده های رشد جنین خواهر و برادر با توجه به روز انتقال جنین در درمان محیط کشت انسانی وجود دارد.

مقایسه میانگین روزهای کشت

برای انتقال جنین سه روز کشت به محیط کشت جدید میانگین تعداد جنین های ۶ سلولی بهترین است. میانگین تعداد جنین برای انتقال از هر رسانه انتخاب شده و میانگین نمرات کیفیت جنین انتقال یافته بود. بین دو سیستم فرهنگ تفاوت معنی داری وجود ندارد. علاوه بر این تعداد جنین های فوق طبیعی در حال توسعه به مرحله بلاستوسیست برای حفظ سرمازدگی بین رسانه ها تفاوت معنی داری نداشت.

مقایسه تعداد بلاستوسیست ها در روز کشت های مختلف

در مورد انتقال جنين در روز ۵ به محیط کشت انسانی جدیدتر ميانگين تعداد بلاستوسيست ها در روز ۵ در محيط متوسط ​​در مقايسه با کشت هاي متوالي به طور معني داري بالاتر بود و تعداد قابل توجهي بالاتر از بلاستوسيست ها براي انتقال از محيط واحد انتخاب شدند. گرچه میانگین نمرات کیفیت جنین های انتخاب شده برای انتقال به محیط کشت تازه مشابه بودند. یک سیستم درجه بندی صریح تر برای بلاستوسیست ها (۱۶ ، ۱۷) ممکن است تصویری دقیق تر از روند انتخاب مشاهده شده در این مطالعه را ارائه دهد. در ۲۲ مورد از ۴۴ انتقال (۵۰٫۰٪) ۵ مورد از ۴۴ انتقال (۴/۱۱٪) از رسانه هاي متوالي فقط ۱۷ و ۴۴ مورد از ۴۴ انتقال (۶/۳۸٪) از تنها رسانه ها را براي انتقال از هر دو رسانه انتخاب كردند. میانگین تعداد بلاستوسیستهای موجود در روز ۵ در محیط کشت واحد به طور معنی داری بیشتر است. پشتیبانی از این ایده که یک رسانه واحد می تواند انجام دهد و همچنین کشتهای پی در پی. نتایج این مطالعه همچنین نشان می دهد که استفاده مداوم از یک رسانه واحد بر رشد جنین تأثیر منفی نمی گذارد. همانطور که توسط دیگران پیشنهاد شده و نشان داده شده است (۶-۹). در این مطالعه هیچ تلاشی صورت نگرفته است که به طور هدفمند از هر درمان جنین منفرد انتخاب شود بلکه بهترین جنین ها صرف نظر از درمان برای جایگزینی انتخاب می شوند. با این حال برای مطالعه بیشتر روی محیط کشت جنین احتمال استفاده از دو (یا چند) کشت متفاوت وجود دارد.

پروتکل منفرد کشت جنین

محیط کشت ها در یک پروتکل کشت جنین خواهر و برادر با اجازه دادن جنین در داخل هر بیمار به انتخاب “کدام” از بین دو بستری که ترجیح می دهند نرخ کاشت بالاتر را ارتقا می دهند. از مزایای پروتکل منفرد مداوم موفق می توان به کاهش پتانسیل برای از بین رفتن جنین و / یا معرفی آلاینده ها از طریق خطاهای دست زدن، کاهش استرس جنینی از جمله کاهش دما و نوسانات یا حتی پیپتینگ جنین اشاره کرد. گرچه کاهش در هزینه مصالح مورد استفاده از اهمیت محدودی برخوردار است. لازم به ذکر است که اگر آزمایشگاه یا محیط کشت کمتر از حد مطلوب باشد ، آزمایش مداوم بدون وقفه ممکن است کمتر موفقیت آمیز باشد ، زیرا ممکن است در طول دوره کشت ترکیبات آلی فرار و محلول در آب و یا آب حل شونده وجود داشته باشد. داده های ارائه شده در اینجا حاکی از آن است که با کنترل دقیق محیط محیط کشت ، به عنوان مثال ، با استفاده از کوزه های شیشه ای آب بندی شده ای که به اتمسفر خاص گاز مجهز شده اند ، ممکن است این نگرانی به حداقل برسد. این مطالعه نشان می دهد که هیچ گونه مزیت آشکاری در استفاده از بسترهای پی در پی بر روی یک محیط واحد وجود ندارد و محیط کشت ناشر بدون وقفه می تواند از نظر رشد جنینی و نتایج بالینی موفقیت آمیز باشد. اگر شرایط آزمایشگاهی از نزدیک مورد بررسی قرار گیرد و از اقدامات احتیاطی در برابر نوسانات جوی استفاده شود. همچنين نياز به مطالعات دقيق تري را براي به چالش کشيدن آنچه در نظر گرفته مي شود پذيرفته شود ، يا روش هاي فرهنگي جنيني سنتي باشد ، تأکيد مي کند.

پاسخی بگذارید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *