Leave a comment

محیط کشت آنتی بیوتیک دار

کاربرد آنتی بیوتیک سیکلوهگزمید در محیط کشت

مشخص شده است که وجود سیکلوهگزیمید در محیط کشت در افزایش تعداد ایزوله های قارچ های بیماری زا از مواد بالینی و سایر منابع دارای ارزش تاثیر گذار است. بسیاری از محیط های درماتوفیت را از موارد مشکوک به انیکومایکوزیس در انسان جدا سازی شده است و از مقیاس گاو و موهای زائد حیوان مشکوک به استفاده از یک محیط سیکلو هگزیمیدکن حاوی سیکلو هگزیمیدکن حاوی محیط های مشابه که حاوی سیکلوهگزیمید نیستند. طبق مطالعات انجام شده مشخص شد که كه استفاده از محیط کشت های سیكلوهگزیمیدكنترل در مایكوزهای انسانی فقط تعداد کمی بیشتر از ایزول ها را نسبت به آگار ناخوشایند مجاز می داند اما تعداد قارچ های ساپروفیت در لوله ها کاهش یافته است.. در این مطالعات نسبتاً معدود بیمار مورد بررسی قرار گرفتند. محیط سیکلوهگزیمید در کشت مواد کلینیکی دارای آلودگی توسط کپک های ساپروفیتیک است اما در محیط Littman در ظرف پتری رشد درماتوفیت ها زودتر آغاز شده است.

موارد استفاده محیط کشت دارای سیکلوهگزمید

از محیط کشت آنتی بیوتیک دار سیکلوهگزیمید در جداسازی Coccidioides immitis و در جداسازی درماتوفیت ها از کفش و غرفه دوش استفاده شده است. روزنتال دانشمندی بود که موفق شدند درصد بیشتری از ایزوله ها را از رسوبات آب حمام پا با استفاده از یك محیط حاوی سیكلو هگزیمید مشابه نسبت به سایر رسانه ها بدست آورند. از قارچ های بیماری زا مورد مطالعه انسان به نظر می رسد Cryptococcus neoformans ، Allescheria boydii و Aspergillus fumigatus تنها گونه هایی هستند که توسط سیکلوهگزیمید در غلظت های معمول در محیط کشت قارچ شناسی مهار می شوند.

مقایسه محیط دارای سیکلوهگزمید با محیط کشت خالص

استفاده از محیط کشت آگار سیکلوهگزیمید-چیورامفنیکلول در ۷۱۹ بوته از ۶۰۰ بیمار پوست پیوسته نشان داده است که این برتری نسبت به آگار استاندارد Sabouraud به عنوان یک محیط جداسازی برای کشت روتین پوستی است. با استفاده از این محیط لوله های آلوده بیش از ۵۰٪ کاهش یافته و جداسازی درماتوفیت ها تقریباً ۱۰۰٪ افزایش یافته است. ناخالص و ۳۷۰ جوامع DEEMATOLOGY INVESTIGATIVE میکروسکوپی درماتوفیت با درج این آنتی بیوتیک ها در غلظت مورد استفاده تغییر نمی کند. اگرچه چند قارچ از اهمیت پاتولوژیک توسط سیکلوهگزیمید مهار می شود اما بروز این گونه ها در منطقه نیویورک نادر است. برتری اثبات شده از محیط کشت آنتی بیوتیک دار غنی شده در جداسازی درماتوفیتها ما را در واحد پوست و سرطان نیویورک ترغیب کرده است که از سیکلوهگزیمید – کلرامفنیکلول حاوی آگار به عنوان واسطه استاندارد جداسازی در تشخیص قارچ شناسی استفاده کنیم و جایگزین محیط Sabouraud شود.

نقش آنتی بیوتیک ها در سرکوبی ساپروفیت ها

نقش دقیق این آنتی بیوتیک ها در محیط کشت ها در جداسازی پایه پوستی کاملاً مشخص نشده است. تا حد زیادی به دلیل سرکوب ارگانیسم های ساپروفیت به سرعت در حال رشد است اما به نظر می رسد عوامل دیگر درگیر هستند. این ایده با این واقعیت پشتیبانی می شود که در ۲۶ مورد گزارش شده در اینجا محیط Sabouraud کاملاً استریل باقی مانده است در حالی که درماتوفیت ها روی لوله های سیکلوهگزیمید مربوطه ظاهر می شوند. بر اساس یک نظریه آنتی بیوتیك ها با عملكرد بر روی سیستم های آنزیمی تغییر قارچ ها از انگلی به مرحله ساپروفیت را تسهیل می كنند. تحقیقات بیشتر در این زمینه شاید بسیار سودمند باشد.

خلاصه مطلب

در معاینه معمول قارچ شناسی ۶۰۰ بیمار پیاپی، سیکلوهگزیمید- کلرامفنیکلول محیط کشت آگار در جداسازی درماتوفیتها نسبت به آگار سابورود بسیار برتر است. تقریباً دو برابر بیشتر از محیط حاوی آنتی بیوتیک نسبت به محیط صبورود جدا شد. به نظر می رسد محیط سیکلوهگزیمید-کلرامفنیکل به ویژه در کشت مواد از پوست سر، پا، ناخن و ناخن مفید است. در موسسه ما محیط حاوی سیکلوهگزیمید-کلرامفنیکلول جایگزین آگار استاندارد Sabouraud به عنوان محیط کشت انتخابی در قارچ شناسی تشخیصی معمول شده است.

Leave a comment

محیط کشت قارچ های تجزیه کننده رنگدانه

مطالعه روی قارچ های پوسیدگی سفید

ارقام قارچ پوسیدگی سفید Phanerochaete chrysosporium و Pleurotus ostreatus (IE8) با رشد روی محیط کشت قارچ پیچیده آگار حاوی یکی از ۲۳ رنگ صنعتی مورد آزمایش نشان داد که P. ostreatus قادر به تجزیه ۱۲ از ۲۳ رنگ صنعتی در در ریسه خود بود در حالی که P. chrysosporium فقط ۵ رنگ را تجزیه کرد. این رنگهای صنعتی بر اساس پایداری آنها به طیف وسیعی از pH (pH 3–۱۱)، دما و مقاومت در برابر شرایط در میحط کشت در فلاسکهای مجزا انتخاب شدند. این ظرفیت تجزیه رنگ محیط کشت قارچ های تجزیه کننده با آنزیم های خارج سلولی همراه بود. با این حال عصاره خارج سلولی خام از P. ostreatus قادر به تجزیه تنها پنج رنگ بود که نشان می دهد که سایر مکانیسم های آنزیمی می توانند در تجزیه رنگ در آزمایشات داخل بدن نقش داشته باشند. عصاره خام خارج سلول از Trametes hispida که بر روی دانه جو دوسر رشد کرده است قادر به تجزیه رنگ محیط کشت رنگدانه دار در شرایط آزمایشگاهی ۱۱ از ۲۳ رنگ صنعتی بود.

آنزیم های تولید شده توسط قارچ های پوسیدگی سفید

با هدف یافتن فعالیت تجزیه رنگی بیشتر در محیط کشت و به دلیل آنزیم های لیگنینولیتیک خارج سلولی نشان داده شده است که با رشد در لایه های طبیعی لیگنین تحریک می شوند. Pleurotus ostreatus که به عنوان یک سویه شاخص از آزمایش های اولیه استفاده می شود در محیط های حاوی بسترهای مختلف لیگنین سلولز تولید شد. كشت جامدات با گندم كامل و جو در محیط کشت مایع در محيط كشت جامد مقايسه شد. این بسترهای طبیعی باعث تولید آنزیم های لیگنینولیتیک لاکاز و پراکسیداز منگنز شده و عصاره خارج سلولی خام ظرفیت تجزیه رنگ بالاتر رنگ نسبت به دست آمده از محیط پیچیده را نشان می دهد. P. ostreatus رشد یافته در جو دوسر بالاترین میزان تولید آنزیم حجمی و اختصاصی و فعالیت های رنگ آمیزی را نشان داد. میزان تولید فعالیت لاکاز در کشت جو دوسر ۷٫۵ برابر بیشتر از کشت مایع بود و فعالیت رنگ زدایی در برابرReactive blue از عصاره جو دوسر فاز جامد ۲۳ برابر بیشتر از ماده رویی محیط کشت متوسط پیچیده بود. هیچ فعالیت لیگنین پراکسیداز یا آریل الکل اکسیداز در هیچ یک از مایع رویی کشت P. ostreatus IE-8 مشاهده نشد.

مطالعه روی عصاره سلولی قارچ ها در تجزیه رنگدانه محیط کشت

پس از این تمام قارچها در تخمیر حالت محیط کشت جامد روی جو دوسر رشد کردند. عصاره های خارج سلولی برای تولید آنزیم و رنگ آمیزی مورد آزمایش قرار گرفتند. فعالیت های لیگنین پراکسیداز، منگنز پراکسیداز، لاکاز و الکل ویتریل الکل اکسیداز در عصاره های خام از ۱۶ گونه قارچی مشخص شد. تمام گونه های P. ostreatus در تجزیه ۵ رنگ آزمایش شده محیط کشت رنگدانه در سطوح مختلف فعال بودند اما T. hispida بالاترین فعالیت حجمی را نشان داد. سویه های Bjerkandera adusta پراکسیداز منگنز بالا اما فعالیت کم رنگ و لاکاز را کاهش دادند و Phryerochaete chrysosporium که به عنوان تولید کننده آنزیم های لیگنینولیتیک تحت رشد نیتروژن کم شناخته شده است هیچکدام از آنزیم ها را تولید نکرد و رنگها را در این شرایط رشد تجزیه نکردند. از چهار فعالیت آنزیمی مورد سنجش در این عصاره ها تنها به نظر می رسد که لاکاز با رنگ زدایی رنگ با همبستگی رنگ ارتباط دارد و Trametes hispida بالاترین تولید فعالیت لاکاز را نشان داد که مطابق با بالاترین فعالیت تجزیه رنگ است. هیچ فعالیت لیگنین پراکسیداز را نمی توان در هر یک از گونه های قارچ کشت شده در شرایط رشد روی محیط کشت قارچ های تجزیه کننده رنگدانه تشخیص داد.

Leave a comment

کفیر اثر روی فعالیت میکروبی روده موش

یک مدل خوب برای آزمایش های انسانی

برای مطالعه دقیق روی کفیر نیاز به آزمایش های واقعی است. جمعیت میکروبی که در روده موش ساکن هستند طی سالهای اخیر به طور گسترده مورد مطالعه قرار گرفته است. بنابراین دستگاه گوارش موش یک مدل عالی برای بررسی تأثیر انواع رژیم های غذایی روی این اکوسیستم ارائه می دهد. موشها را می توان در شرایط کنترل شده حفظ کرد و قسمتهای مختلف دستگاه گوارش را می توان پس از کشتن حیوانات نمونه برداری کرد بنابراین از لزوم اتکا به داده های بدست آمده از معاینه مدفوع برای کفیر اثر روی فعالیت جلوگیری می شود. بدیهی است که باید در مطالعات بعدی ماهیت رژیم غذایی و حیوان آزمایشی مورد بررسی قرار گیرد. از قرار گرفتن مجدد داده ها از موش ها به انسان باید جلوگیری شود اگرچه در انسان از توسعه اپیتلیوم دستگاه گوارش برنامه توسعه ای مشابه آنچه در جوندگان مشاهده می شود دنبال می شود.

تشابه لوله گوارش جوندگان
برای مطالعه روی کفیر اثر میکروبی بهترین روش استفاده از مدل های مشابه انسان است. گزارش های قبلی از مطالعات میکروبیوتای معمولی موش ها و انسان نشان می دهد که ترکیب آن به طور کلی جهانی است. احتمالاً این نشان دهنده شباهت های آناتومی و فیزیولوژی دستگاه گوارش این جوندگان است. میکروبیوتای معمولی در طول کل دستگاه گوارش قابل تشخیص است اما انواع خاصی از میکروارگانیسم ها در هر منطقه وجود دارد. در کفیر اثر روی روده موش گونه های عددی غالب به طور واضح باکتری های بی هوازی هستند اما تعداد زیادی از باکتری های میکروب های هوازی و غیر هوازی از نظر جنبه بی هوازی نیز وجود دارند. تعداد گونه ها و جمعیت باکتری ها در بزرگسالان سالم نسبتاً پایدار است. علاوه بر میکرو فلورای طبیعی موجود در دستگاه گوارش، میکروارگانیسم های مختلفی با غذا معرفی می شوند.
این میکرو فلور گذرا تأثیر مهمی در دستگاه گوارش فوقانی دارد. به نظر می رسد این اثر در دستگاه تحتانی کمتر است. علیرغم ثبات آن فلور روده می تواند توسط انواع زیادی از داخلی (اسید معده، نمکهای صفراوی) و عوامل خارجی (رژیم غذایی، عفونت، پیری، آنتی بیوتیک) متاثر شود.

محتوای میکروبی کفیر
هنگامی که محتوای میکروبی کفیر اثر فعالیت مورد مطالعه قرار گرفت مهمترین گروه باکتری ها باکتری های اسید لاکتیک بودند. لاکتوباسیل های موجود در آن که در محیط MRS جدا شده بودند با استفاده از سیستم API-50CH شناسایی شدند. لاکتوکوکوس برویس و لاکتوباسیلوس کفیر در نمونه های kefir مورد بررسی قرار گرفتند اما جدا شده های L. paracasei ، L. plantarum ، L. acidophilus و L. kefiranofaciens پیدا شد. بین جدايه هاي مخمر، مخمرهاي تخمير غير لاكتوز غالب بودند (Saccharomyces cerevisiae، S. unisporus)، اگرچه برخي از مخمرهاي مختلف تخمير لاكتوز مشخص شدند (Kluyveromyces marxianus ، K. lactis و Candida Kefir). مانند ماست میزان لاکتوز در کفیر کاهش می یابد و سطح b-galactosidase در نتیجه تخمیر افزایش می یابد. این مخمرها به کمبود لاکتوز محصول نهایی kefir کمک می کنند.
طبق مطالعات انجام شده رژیم کفیر تأثیر قابل توجهی در ترکیب فلور میکروبی داشت. چشمگیرترین تفاوت ها با کلستریدیا و باکتری های اسید لاکتیک بود.

تاثیر کفیر در تغییر جمعیت میکروفلورای روده

نشان داده شده است که مصرف کفیر میکروبی روده موش همچنین می تواند سطح باکتری های اسید لاکتیک در روده کوچک و روده بزرگ را افزایش دهد. سایر تحقیقات همچنین نشان داده اند که جمعیت لاکتوباسیلوس می تواند تعداد اشریشیا کولی و کوکهای بی هوازی مدفوع را کاهش دهد. در مطالعه ای که روی موش های آزمایشگاهی انجام شد تعداد اعضای Enterobacteriaceae در مخاط روده بزرگ اندکی کاهش یافت. با این حال تعداد باکتری های بی هوازی و تعداد باکتری های بی هوازی گرم منفی در روده بزرگ به طور قابل توجهی کاهش یافته و این در موش های تحت درمان با ۷ ماه برجسته تر بود. کلستریدیا کاهش سولفیت نیز به طور قابل توجهی کاهش یافته است. این نشان می دهد که پس از یک دوره استقرار میکرو فلورای کفیر اثر ضد حسی علیه میکرو فلورای بی هوازی اعمال می کند. از دیدگاه پزشکی مهار میکرو فلورای بی هوازی مورد توجه است. مطالعات متعددی نشان داده اند که باکتری های بی هوازی گرم منفی اغلب در مکانهای آلوده در بیماران با عوارض سپتیک بعد از عمل جراحی جدا می شوند.

رژیم کفیر
نسبت افزایشی آنتروکوکهایی که در روده کوچک در طول درمان با رژیم کفیر مشاهده شده بود نیز بسیار مهم بود. تعداد اینتر کوکسی ها با رژیم kefir 10 برابر افزایش یافته است. انتروکوکها در مکانهای مشابه محیطی با لیستریا رخ می دهند. با توجه به مطالعات قبلی Enterococcus faecium در برابر طیف گسترده ای از لیستریا فعالیت ضد میکروبی دارد. اگرچه اهمیت این تعامل ممکن است با عدم وجود مواد مغذی مانند پپتیدها که برای ضد میکروب ضروری به نظر می رسد محدود باشد.

درمان آبسه های شکمی با کفیر

اثرات رژیم غذایی (مانند مصرف کفیر) بر ترکیب میکرو فلورای روده ممکن است به این پدیده کمک کند که محتوای روده بزرگ موش در رژیم غذایی گوشت عفونت بیشتری در القاء آبسه های داخل شکمی در مقایسه با محتوای روده بزرگ موش ها در رژیم غذایی معمولی چو دارد. گزارش های قبلی نشان داده اند که در انسان ، رژیم غذایی کم مایع یا رژیم غذایی گوشتی به شدت روی تأثیر میکرو فلورای مدفوع انسان تأثیر نمی گذارد. بنابراین تغییرات رژیم غذایی کفیر ممکن است تأثیر کمی در جمعیت میکروبی در روده بزرگ انسان داشته باشد. از طرف دیگر این واقعیت که حیوانات در سنین جوانی تحت کنترل رژیم غذایی قرار گرفتند ممکن است در استعمار میکرو فلور در دستگاه گوارش بسیار مهم باشد. کار حاضر نشان می دهد که رژیم غذایی kefir بر عملکرد میکروبی کفیر اثر روده موش اثر برجسته ای دارد. کفیر دارای فعالیت ضد میکروبی در شرایط آزمایشگاهی در برابر طیف گسترده ای از باکتری های گرم مثبت و گرم منفی و قارچ ها است. البته اثر رژیم غذایی مصرف شده توسط میزبان حیوانات ممکن است نتیجه تأثیر مستقیم اجزای رژیم غذایی بر میکروبهای دستگاه گوارش نباشد. رژیم غذایی به وضوح بر وضعیت کلی حیوان تأثیر می گذارد و هرگونه تغییر ایجاد شده در فیزیولوژی میزبان حیوانات به طور غیرمستقیم بر میکروب های موجود در اکوسیستم دستگاه گوارش تأثیر می گذارد. آشکار است که در مطالعات اکولوژیکال آینده دستگاه گوارش باید ماهیت رژیم غذایی مانند کفیر با دقت مورد توجه قرار گیرد.

Leave a comment

کفیر در لوله گوارش

پروبیوتیک
دانه کفیر یک پروبیوتیک است. اصطلاح پروبیوتیک به میکروارگانیسم های زنده ای گفته می شود که در دستگاه گوارش زندگی می کنند و تأثیرات مفیدی بر روی میزبان دارند. تخمین زده می شود که بیش از چهارصد گونه باکتری در دستگاه گوارش زندگی می کنند و این باکتری های درون زا میکروفلور روده را تشکیل می دهند. حتی با وجود روشهای سنتی شمارش صفحات گونه های بیشتری کفیر در لوله گوارش نیز وجود دارند اما قابل کشت نیستند. پس از عبور از معده و روده کوچک برخی از پروبیوتیک ها زنده مانده و به طور موقت در روده بزرگ باقی مانده و زندگی می کنند. برای زنده ماندن و استعمار دستگاه گوارش باکتری های پروبیوتیک باید تحمل بالایی به اسید و صفرا نشان دهند و توانایی چسبندگی به سطوح روده را داشته باشند.

اثرات خوب کفیر در لوله گوارش
اثرات بهداشتی احتمالی پروبیوتیک ها از جمله کفیر در لوله گوارش شامل تحریک سیستم ایمنی، کاهش تحمل لاکتوز، اثر هیپوکلسترولمی و پیشگیری از عود سرطان است. ثابت شده است که پروبیوتیک ها فعالیت مهاری در جهت رشد باکتری های بیماری زا از جمله اشرشیا کولی، لیستریا مونوسیتوژنز، سالمونلا و سایر موارد دارند. این مهار ظاهراً به دلیل تولید ترکیبات مهاری مانند باکتریوکسین ها، پراکسید هیدروژن، اسیدهای آلی و چسبندگی رقابتی به اپیتلیوم است.

کفیر از چه تشکیل شده است؟
کفیر یک شیر تخمیر شده است که در کشورهای قفقاز سرچشمه گرفته است. این شیر تخمیر شده اسیدی کمی گازدار است و مقادیر کمی الکل دارد. خودِ kefir از شیرهای سنتی تخمیر شده (ماست) متمایز سات زیرا تنها از دانه ها تهیه شده است که از باکتری ها و مخمرها تشکیل شده است. نوشیدنی کفیر حاوی میکرو فلورای زنده از غلات است که پس از فرآیند تخمیر توسط فیلتراسیون برداشته می شود. دانه ih گروه هایی از باکتری های اسید لاکتیک (لاکتوباسیل ها، لاکتوکوک ها و لوکونوستوک)، باکتری های اسید استیک (Acetobacter aceti) و مخمرها (Saccharomyces cerevisiae ، Candida Kefir ، Kluyveromyces marxianus) هستند که توسط یک ماتریس اگزوپلی ساکاریدهای مختلف (که در کنار هم قرار دارند) نگه داشته می شوند و دانه های کفیر در گوارش را تشکیل می دهند.

Leave a comment

کفیر شرایط نگهداری

کفیر یک محصول لبنی تخمیر شده منحصر به فرد است که توسط مخلوطی از باکتری های اسید لاکتیک و مخمر تولید می شود. این نوشیدنی سالم است و تأثیر محافظتی آن بر روی آسیب سلولی مورد مطالعه قرار گرفته و ثابت شده است. دانه ها به شکل دانه های نامنظم هستند که در اندازه آنها از قطر ۳ تا ۳۵ میلی متر متغیر است. در این دانه های پلی ساکارید کفیران به عنوان ماتریسی عمل می کند که در این دانه های کفیر باکتری های اسید لاکتیک و مخمر به صورت همزیستی زندگی می کنند. مسیرهای متابولیکی منتهی به تولید کفیران کاملاً درک نشده است. با این حال مشخص شده است که کفیران از واحدهای تکراری از هگزا- و هپتاساکاریدهای شاخه ای از گلوکز و گالاکتوزهای متشکل از شاخه های تکراری تشکیل شده است.

تفاوت کفیرهای مناطق مختلف دنیا

میزان میکروبی دانه های کفیر نگهداری در درجه اول به منبع آنها بستگی دارد. گزارش شده است که دانه ها بسته به منبع یا کشور مبدا حاوی لاکتوباسیل، لاکتوکوکی و مخمر و بعضا باکتریهای اسید استیک هستند. با این حال عوامل مهمی که بر خصوصیات kefir تأثیر می گذارد تعداد میکروارگانیسم ها و نسبت گونه ها به یکدیگر است.

جمعیت میکروبی کفیر

بسیاری از محققان به طور مفصلی میکرو فلورای موجود در دانه کفیر شرایط را مطالعه کرده و Lactobacillus brevis، Lactobacillus viridescens، Lactobacillus gasseri، Lactobacillus fermentum و Lactobacillus casei ، Lactobacillus kefir، Lactobacillus acidophilus، Leuconostoc ، Lactobacillus kefiranofaciens و Lactobacillus kefirgranum و Lactobacillus parakefir را شناسایی کرده اند. با این حال گزارش شده است که ۱۰۰٪ ۱۶S rDNA L. kefiranofaciens و L. kefirgranum تشابه توالی دارند بنابراین پیشنهاد شده است که L. kefirgranum باید دوباره طبقه بندی شود.

عوامل تاثیر گذار بر کیفیت کفیر

نسبت kefiranofaciens ssp. و kefirgranum ssp تازه توزیع میکروبی دانه های کفیر، نسبت دانه به شیر، زمان و دمای تشکیل kefir، ماده تولید شده هنگام جداسازی دانه ها، شستشوی دانه ها و سردسازی به طرز چشمگیری بر کیفیت محصول و میکرو فلور دانه ها تأثیر می گذارد. در حالی که اطلاعات مربوط به انواع دانه های کفیر شرایط نگهداری ایرلندی، تایوانی، روسی و برخی اروپایی در دسترس است اطلاعات کمی در مورد پیچیدگی های میکروبی دانه های ترکیه در زمان تخمیر و ذخیره محصول منتشر شده است.

Leave a comment

محیط کشت اسمولاریته

اسمولاریته یک پارامتر مهم برای تهیه هر گونه محیط کشت است زیرا به محیط کمک می کند تا از نظر طبیعی رشد سلول ها از محیط طبیعی سلول ها شباهت داشته باشد. بعضی از املاح آلی که به عنوان اسموپروتکتانت ها شناخته می شوند برای مقاومت در برابر سلول ها در برابر طیف گسترده ای از تنش اسمزی مورد استفاده قرار می گیرند. تاکنون در رشد میکروبی اسمولاریته به طور سیستماتیک به عنوان یک پارامتر برای محیط کشت اسمولاریته افتراقی برای میکروارگانیسم های کشت شده مورد بررسی قرار نگرفته است. چندین میکروارگانیسم فعال متابولیکی که زیر میکروسکوپ دیده می شوند در شرایط آزمایشگاهی قابل کشت نیستند.

موارد مهم در کشت میکروارگانیسم های سخت کشت

برای رشد این میکروارگانیسم های غیرقابل تحمل روی محیط کشت روشهای جدید اخیرا مورد استفاده قرار گرفته است. بعضی از باکتریها وابستگی مشترک کشتی دارند. آنها فقط در حضور میکروارگانیسم های کمکی رشد می کنند و کشت آن ها نیاز به محیط اسمولاریته مختلط را دارد که در آینده محقق خواهد شد. پایگاه دانش فعلی رسانه رشد میکروبی عامل محدود کننده ای در کشت میکروارگانیسم های مختلف است. گسترش پایه دانش به تحقیقات گسترده ای در این زمینه نیاز دارد و به دستیابی به کشت مناسب میکروارگانیسم های غیرقابل تحمل کمک می کند. کنترل بهتر pH، استفاده از پروب های pH بهتر و کنترل اسمولاریته تا حد زیادی در محیط کشت اسمولاریته میکروبی فعلی از بین رفته است. ما انتظار داریم که یک تحقیق منظم در این راستا برای کشت میکروارگانیسم های غیر قابل تحمل مشاهده کنیم.

الگوبرداری از کشت سلول های حیوانی

نگاهی به محیط کشت سلول های حیوانی که مورد توجه تحقیقات اخیر قرار گرفته است می تواند پیشرفت بیشتر کشت های میکروبی را هدایت کند. این امکان وجود دارد که عوامل ژل جایگزین بتوانند از رشد میکروارگانیسم هایی که روی آگار رشد نمی کنند حمایت کنند. ارزیابی سیستماتیک از عوامل ژلینگ بسیار مورد نیاز است. ما انتظار داریم که میکروب شناسی “عصر طلایی” دیگری با تجدید علاقه به محیط کشت اسمولاریته های رشد داشته باشد.

Leave a comment

محیط کشت pH

محیط کشت pH رشد میکروب ها را تحت تأثیر قرار می دهد. هر ارگانیسم pH بهینه دارد که در آن بهترین رشد را می کند. تغییر این مقدار pH منجر به رشد نامطلوب می شود. در اکثر باکتریها با نزدیک شدن به مقدار بهینه “pH” و کاهش مرتب آن در میزان و سرعت رشد تاثیر دارند در حالی که شروع به تغییر از نقطه مطلوب می کند. هر گونه میکروارگانیسم براساس دامنه مشخصه ای از مقادیر pH (و در نتیجه محیط کشت) خود که در آن رشد می کند و به بهترین شکل تولید می شود به سه نوع تقسیم می شود. اگرچه می دانیم که دامنه pH کلی برای اکثر باکتری ها ۵ تا ۹ (بهینه ۷) است اما می توانند اسیدوفیل (دامنه pH از ۰ تا ۵/۵)، نوتروفیل (دامنه pH از ۵٫۵ تا ۸٫۰) و آلکالوفیلیک (دامنه pH از ۸٫۵ تا ۱۱٫۵) باشند.

میکروارگانیسم های خاص
این میکروارگانیسم ها دقیقاً مانند سایر ارگانیسم ها به محیط کشت pH فیزیولوژیکی داخل سلولهای خود نیز نیاز دارند. توانایی زنده ماندن در pH شدید یا زیاد یا پایین به توانایی آنها در خنثی کردن اختلاف محیط با pH فیزیولوژیکی بستگی دارد. میکروارگانیسم هایی مانند Helicobacter pylori در شرایط بسیار اسیدی در معده یافت می شوند بنابراین برای حفظ اختلافات محیطی خود اورهاز تولید می کنند. اوزهاز آنزیمی است که اوره را تخریب می کند و اسیدیته را کاهش می دهد. باکتریهای دیگری نیز وجود دارند که برای زندگی در pH قلیایی به عنوان مثال در نزدیکی افراد سیگاری، چشمه های زمین شناسی مواد معدنی که مواد معدنی بسیار قلیایی را به اقیانوس شلیک می کنند تخصص دارند. تغییر در شرایط اسیدی یا قلیایی محیط با تغییر رنگ با استفاده از شاخص های pH نشان داده می شود. آنها در محیط کشت هایی برای تمایز بین گروه های مختلف میکروارگانیسم ها بر اساس خاصیت تولید اسید یا قلیایی مورد استفاده قرار می گیرند. به عنوان مثال ائوزین و متیلن آبی، برومو تیمول آبی، اسیدفوچسین، فنل قرمز و غیره.

Leave a comment

محیط کشت جامد

محیط کشت جامد
در روزهای اول، جداسازی باکتری ها برای تهیه کشت خالص در محیط کشت مایع بسیار دشوار بود. غالباً هرگونه تلاش برای تهیه کشت خالص با استفاده از کشت های مایع به دلیل اقدامات کند و خسته کننده باعث آلودگی می شود. بنابراین نیاز به یک محیط جامد وجود داشت که با افزودن ماده ژل کننده به آب مایع به دست آمد. اولین ماده ژل مورد استفاده ژلاتین توسط رابرت کچ در سال ۱۸۸۱ برای تهیه یک ماده جامد بود.

مشکلات استفاده از ژلاتین در کشت مایع
اما از آنجا که ژلاتین داخل محیط کشت جامد در دمای حدود ۳۵ درجه سانتیگراد ذوب می شود و توسط باکتری ها هضم می شود استفاده از آن با مشکل روبرو شد. این مشکلات منجر به کشف یک آگار عامل ژل جایگزین شد. آنجلینا فانی ایلشموس، همسر والتفر هسه، همکار كوچ، ابتدا استفاده از آگار را به عنوان جانشینی برای تهیه كشت محیط جامد پیشنهاد داد. به تدریج مزایای مختلف آگار باعث شده است که این ماده در محیط کشت جامد در بین دانشمندان بسیار پرطرفدار شود زیرا در طیف وسیعی از دما (در دمای ۳۲ درجه سانتیگراد تا ۴۲ درجه سانتیگراد، در دمای ۸۵ درجه سانتیگراد ذوب شده) پایدار است و بنابراین برای رشد موجودات مزوفیلی مناسب است.

ویژگی های خوب آگار به عنوان جامد کننده

بعلاوه آگار داخل محیط کشت جامد هیچ اثر سمی بر باکتریها ندارد. از ویژگیهای انتشار خوبی برخوردار است و توسط بیشتر باکتریها هضم نمی شود. همچنین به نظر می رسد آگار وضوح خوبی دارد و از نظر متابولیکی بی اثر است. اما از دیدگاه دیگر، آگار برای کشت میکروبهای گرمازا مناسب نیست و PCR را به روش وابسته به غلظت مهار می کند. علاوه بر این هزینه بالای آگار کار تحقیقاتی را بسیار گران ساخته و به دلیل استفاده زیاد آن در آزمایشگاه ها، منابع طبیعی آگار (یعنی Gelidium sp. ، Gracillaria sp. و Pterocladia sp.) بیش از حد مورد بهره برداری قرار گرفته و جامعه علمی را دچار مشکل ساخته است. برای جستجوی برخی منابع جایگزین دیگر از عوامل ژل سازی برای محیط کشت جامد استفاده کنید.

Leave a comment

محیط کشت افتراقی

محیط کشت میکروارگانیسم های سخت کشت
محیط کشت افتراقی برای مطالعه مکانیسم مقاومی میکروارگانیسم های افتراقی برای بیوتکنولوژی، تکامل و مطالعات روی جستجوی زندگی در شرایط سخت استفاده می شوند. با این حال تکنیک های کشت معمولی معمولاً در شرایط دما و فشار زیاد، pH پایین یا زیاد، از رشد موجودات سخت زیست پشتیبانی نمی کنند. کشت ترموفیل ها روی محیط کشت های سلولزی و پلیت های آگار حاوی لوریا-برتانی براس و یا براس نوترینت امکان پذیر نمی باش چونکه این محیط ها در ۷۰ درجه سلسیوس نمی توانند نگه داری شوند. اخیراً تکنیک کشت جامد با استفاده از صفحه جامد متخلخل ساخته شده از سلولز نانوالیافی ساخته شده است که می تواند ماهیت خود را تا ۲۶۰ درجه سلسیوس در ۲۵ مگاپاسکال حفظ کند. این یافته یک محیط کشت افتراقی همه کاره برای حمایت از رشد تعداد گسترده ای از میکروارگانیسم های افتراقی از جمله اسیدوفیل ها، قلیایی دوست ها، ترموفیل ها، اسیدوترموفیل ها و آلکالوترموفیل ها در شرایط شدیدا سخت فیزیولوژیکی در آزمایشگاه فراهم کرده است.

Leave a comment

محیط کشت قارچ

محیط کشت قارچ ها

محیط کشت های حاوی منبع کربوهیدرات زیاد، منبع نیتروژن برای رشد قارچ ها در pH 5 تا ۶ و دامنه دما از ۱۵ تا ۳۷ درجه سانتیگراد برای کشت قارچ ها مورد نیاز است. دو نوع کلی از محیط کشت قارچ وجود دارد: طبیعی و مصنوعی. محیط های طبیعی از بسترهای طبیعی مانند ساقه های علفی یا چوبی، دانه ها، برگها، آرد ذرت، جوانه گندم و جو دوسر و غیره تشکیل می شوند. محیط های طبیعی معمولاً آماده سازی آسان دارند اما میزان ترکیبات داخل آنها ناشناخته است. برخی از نمونه ها عبارتند از: آگار آرد ذرت، آگار دکستروز سیب زمینی، آگار آب میوه و آگار سرگین.

محیط کشت مصنوعی

از طرف دیگر محیط کشت قارچ های مصنوعی حاوی ترکیبات شناخته شده ای هستند. این نوع محیط ها حاوی مقادیر مشخصی از کربوهیدرات، ازت و منابع ویتامین هستند. محیط زاپک داکس ، گلوکز-آسپاراگنین و نوروسپورا کراسا در این گروه قرار می گیرند. محیط های عمومی که معمولاً برای کشت قارچ مورد استفاده قرار می گیرد آگار دکستروز (SDA) است که با pH اسیدی (۵٫۶) از نظر تغذیه ای ضعیف است. محیط های انتخابی مانند محیط کشت مخمر و محیط تست درماتوفیت برای پاتوژن های قارچی مانند Cryptococcus neoformans و dermatophytes بسیار مهم هستند. آگار ترکیب شده با برنج، کازئین و سایر مواد مغذی مانند آگار ذرت با توئین ۸۰ برای تمایز گونه های کاندیدا و گونه های تریکوفیتان استفاده می شود. آگار دکستروز سیب زمینی برای تشکیل کنیدی و رشد رنگدانه تریکوفیتان روبروم استفاده می شود. بیشتر محیط کشت قارچ های مورد استفاده در آزمایشگاه در مقیاس بزرگ مقرون به صرفه نیستند بنابراین صنعتگران شروع به استفاده از چندین منبع ارزان کربن ارزان قیمت کرده اند.